IPS培養(yǎng)基是用于hPSC維持培養(yǎng)的無飼養(yǎng)層、無動(dòng)物源成份的培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基含有用于hPSC維持培養(yǎng)所需的最基本成份，為多能干細(xì)胞培養(yǎng)提供了一種更為簡單的配方，下面我們來詳細(xì)看看。
IPS培養(yǎng)基制備的基本方法和注意事項(xiàng)
1、IPS培養(yǎng)基配方的選定
同一種IPS培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會(huì)有某些差別。因此，除所用的是標(biāo)準(zhǔn)方法，應(yīng)嚴(yán)格按其規(guī)定進(jìn)行配制外，一般均應(yīng)盡量收集有關(guān)資料，加以比較核對(duì)，再依據(jù)自己的使用目的，加以選用，記錄其來源。
2、IPS培養(yǎng)基的制備記錄
每次制備IPS培養(yǎng)基均應(yīng)有記錄，包括IPS培養(yǎng)基名稱，配方及其來源，和各種成份的牌號(hào)，最終pH值、消毒的溫度和時(shí)間制備的日期和制備者等，記錄應(yīng)復(fù)制一份，原記錄保存?zhèn)洳?，?fù)制記錄隨制好的IPS培養(yǎng)基一同存放、以防發(fā)生混亂。
3、IPS培養(yǎng)基成分的稱取
IPS培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯(cuò)亂，一次完成，不要中斷?？蓪⑴浞街糜诎鴤?cè)，每稱完一種成分即在配方面軍做出記號(hào)，并將所需稱取的藥品一次取齊，置于左側(cè)，每種稱取完畢后，即移放于右側(cè)。*稱取完畢后，還應(yīng)進(jìn)行一次檢查。
4、IPS培養(yǎng)基各成份的混合和溶化
IPS培養(yǎng)基所用化學(xué)藥品均應(yīng)是化學(xué)純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋，以防有微量銅或鐵混入IPS培養(yǎng)基中，使細(xì)菌不易生長。使用不銹鋼鍋加熱溶化，可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動(dòng)蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時(shí)、可先用溫水加熱并隨時(shí)擾動(dòng)、以防焦化、如發(fā)現(xiàn)有焦化現(xiàn)象、該IPS培養(yǎng)基即不能使用，應(yīng)重新制備。待大部分固體成分溶化后，再用較小火力使所有成分*溶化，迄至煮沸。如為瓊脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過程中，因蒸發(fā)而丟失的水分，最后必須加以補(bǔ)足。
5、IPS培養(yǎng)基pH的初步調(diào)正
因IPS培養(yǎng)基在加熱消毒過程中、pH會(huì)有所變化，IPS培養(yǎng)基各成分*溶解后，應(yīng)進(jìn)行PH的初步調(diào)正。例如，牛肉浸液約可降低pH0.2，而腸浸液pH卻會(huì)有顯著的升高。因此，對(duì)這個(gè)步驟，操作者應(yīng)隨時(shí)注意探索經(jīng)驗(yàn)、以期能掌握IPS培養(yǎng)基的最終PH，保證IPS培養(yǎng)基的質(zhì)量。PH調(diào)整后，還應(yīng)將IPS培養(yǎng)基煮沸數(shù)分鐘，以利IPS培養(yǎng)基沉淀物的析出。
6、IPS培養(yǎng)基的過濾澄清
液體IPS培養(yǎng)基必須澄清，瓊脂IPS培養(yǎng)基也應(yīng)透明無顯著沉淀，因此，須要采用過濾或其它澄清方法以達(dá)到此項(xiàng)要求。一般液體IPS培養(yǎng)基可用濾紙過濾法，濾紙應(yīng)折疊成折扇或漏斗形，以避免因液壓不均勻而引起濾紙破裂。
瓊脂IPS培養(yǎng)基可用清潔的白色薄絨布趁熱過濾。亦可用中間夾有薄層吸水棉的雙層紗布過濾。新制肉、肝、血和土豆等浸液時(shí)、則須先用絨布將碎渣濾去，再用濾紙反復(fù)過濾。如過濾法不能達(dá)到澄清要求、則須用蛋清澄清法。即將冷卻至55~60°C的IPS培養(yǎng)基放入大的三角燒瓶內(nèi)，裝入量不得超過燒瓶容量的1/2，每1000mlIPS培養(yǎng)基加入1~2個(gè)雞蛋的蛋白，強(qiáng)力振搖3~5分鐘，置高壓蒸汽滅菌器中、121°C加熱20分鐘、取出趁熱以絨布過濾即可。
7、IPS培養(yǎng)基的分裝
IPS培養(yǎng)基的分裝，應(yīng)按使用的目的和要求，分裝于試管、燒瓶等適當(dāng)容器內(nèi)。分裝量不得超過容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵，其外還須用防水紙包扎（現(xiàn)試管一般多有用螺旋蓋者）。分裝時(shí)能使用半自動(dòng)或電動(dòng)的定量分裝器。分裝瓊脂斜面IPS培養(yǎng)基時(shí)，分裝量應(yīng)以能形成2/3底層和1/3斜面的量為洽當(dāng)。分裝容器應(yīng)預(yù)先清洗干凈并經(jīng)干烤消毒，以利于IPS培養(yǎng)基的*滅菌。每批IPS培養(yǎng)基應(yīng)另外分裝20mlIPS培養(yǎng)基于一小玻璃瓶中，隨該批IPS培養(yǎng)基同時(shí)滅菌，以為測(cè)定該批IPS培養(yǎng)基最終pH之用。
8、IPS培養(yǎng)基的滅菌
一般IPS培養(yǎng)基可采用121°C高壓蒸汽滅菌15分鐘的方法。在各種IPS培養(yǎng)基制備方法中，如無特殊規(guī)定，即可用此法滅菌。
某些畏熱成分，如糖類，應(yīng)另行配成20%或更高的濃液，以過濾或間歇滅菌法消毒，以后再用無菌操作技術(shù)、定量加于IPS培養(yǎng)基。明膠IPS培養(yǎng)基亦應(yīng)用較低溫度滅菌。血液、體液和抗生素等則應(yīng)以無菌操作技術(shù)抽取和加入于經(jīng)冷卻約50°C左右的IPS培養(yǎng)基中。
瓊脂斜面IPS培養(yǎng)基應(yīng)在滅菌后立即取出，冷至55℃-60℃時(shí)，擺置成適當(dāng)斜面，待其自然凝固。
9、IPS培養(yǎng)基的質(zhì)量測(cè)試
每批IPS培養(yǎng)基制備好以后，應(yīng)仔細(xì)檢查一遍，如發(fā)現(xiàn)破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被IPS培養(yǎng)基沾染等、均應(yīng)挑出棄去。并測(cè)定其最終pH。
將全部IPS培養(yǎng)基放入36±1°C恒溫箱培養(yǎng)過夜，如發(fā)現(xiàn)有菌生長，即棄去。
用有關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)菌株接種1~2管或瓶IPS培養(yǎng)基，培養(yǎng)24~48小時(shí)，如無菌生長或生長不好。應(yīng)追查原因并重復(fù)接種一次，如結(jié)果仍同前，則該批IPS培養(yǎng)基即應(yīng)棄去，不能使用。
10、IPS培養(yǎng)基的保存
IPS培養(yǎng)基應(yīng)存放于冷暗處，能放于普通冰箱內(nèi)。放置時(shí)間不宜超過一周，傾注的平板IPS培養(yǎng)基不宜超過3天。每批IPS培養(yǎng)基均必須附有該批IPS培養(yǎng)基制備記錄副頁或明顯標(biāo)簽。
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